В исследовании был выбран штамм FA-1, ауксотрофный по L-изолейцину Corynebacterium glutamicum, для изучения трансаминазы, которая влияет на синтезL-лейцин и L-валин. В ходе исследования сначала был отключен ген ilvE и обнаружено, что после того, как ген ilvE был отключен, активность синтеза L-валина была потеряна, но способность к синтезу L-лейцина все еще оставалась слабой. Это показывает, что существуют другие аминотрансферазы, которые катализируют синтез L-лейцина. Впоследствии ген aspB продолжали нокаутировать, и способность синтезировать L-лейцин полностью утрачивалась. На основе нокаута ilvE сверхэкспрессия гена aspB в некоторой степени восстанавливала синтез L-лейцина (таблица 1). Эти результаты показывают, что белок, кодируемый aspB, обладает активностью синтеза L-лейцина.
Кроме того, в исследовании был проведен скрининг некоторых эндогенных и экзогенных генов аминотрансфераз и они экспрессировали эти гены аминотрансфераз в штаммах с ко-нокаутом ilvE и aspB, чтобы выяснить, обладают ли эти аминотрансферазы активностью по синтезу аминокислот с разветвленной цепью. Среди них TyrB проявляет специфическую активность синтеза L-лейцина, тогда как YbgE и CallvE демонстрируют двойную активность синтеза L-лейцина и L-валина. Эти результаты показывают, что оптимизация трансаминаз для переключения субстратной специфичности имеет большой потенциал для увеличения выхода аминокислот с разветвленной цепью.
